Gelfree 8100 微量蛋白制备电泳仪

1、产品简介

       在蛋白质组学质谱分析中，蛋白质混合物是如此复杂，低丰度的蛋白质的信号往往会被高丰度的蛋白质的信号掩盖丢失。从电泳凝胶中切除蛋白质条带进行提取很难得到足够的蛋白质。因此，对复杂样本进行有效的分离以进行深入的蛋白质组学质谱分析是关键。

       分析前如何降低样品的复杂程度、获得完整蛋白质、富集低丰度蛋白质、降低高丰度蛋白质对低丰度蛋白质的干扰、保留蛋白质的各种翻译后修饰状态、提高样品处理通量等，已成为蛋白质样品制备方法的重要前提。

       英国Expedeon公司推出了一套新型的微量蛋白制备电泳仪— Gelfree 8100 Fractionation System。该系统使用凝胶洗脱液相组分截留电泳技术（Gel Elution Liquid Fraction Entrapment Electrophoresis），基于蛋白质分子量的不同，对完整蛋白质进行分离，使用移液器在收集室吸取分离出来的蛋白质。

       该系统能同时运行8个样品，按蛋白质的分子量来进行分离，分离的质量范围：3.5kDa—500kDa。相对于其它传统分组方法，具有上样量大、重现性好、分辨率高、回收率高、分离速度快和操作简单的优点。能增大蛋白质组分析的覆盖范围，改善后期质谱分析的结果，提高蛋白质鉴定结果的可信度。

2、特点及应用

◆ 基于分子量的不同对完整蛋白质进行分离纯化，收集;

◆ 蛋白质样品在液相中回收，避免了传统电泳凝胶的染色和条带或点位切割步骤;

◆ 蛋白质分离范围高达3.5kDa—500kDa;

◆ 可同时进行1-8个样品分离;

◆ 用户可根据需要自行设置蛋白质分离程序，分离纯化特定的目标蛋白;

◆ 样品容量大，是普通一维电泳的5倍以上，有利于富集低丰度蛋白质;

◆ 回收率高，>80%;

◆ 重现性好，CV<15%;

◆ 分离过程不受蛋白质疏水性或等电点的影响,这就意味着你几乎覆盖整个蛋白质组。

◆ 简化蛋白质组成的复杂程度，便于使用LC-MS/MS进行蛋白质组学研究;

◆ 蛋白质回收后保留其完整性，便于进行蛋白质组学研究的完整定性;

◆ 蛋白质回收后在溶液内消化，免去了费时的胶内消化步骤;

◆ 特别适合为LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印迹等分析方法制备样品。

3、工作流程

       Gelfree 8100有8个通道，每个通道有一个精确的凝胶柱，柱前面有一个样品装载室，柱后是一个馏分收集室。可以在任何时候使用1-8个通道。样品被加入到样品装载室，施加电流，每个通道的带电分子沿着柱状凝胶移动。洗脱的蛋白收集在一个固定的液体体积内。在预先设定的时间间隔内，仪器会自动暂停，以方便地用吸液管移走液体馏分。为了收集下一个分子量的馏分，序列重新启动，过程继续。

       样品和样品缓冲液混合后加入到上样槽内，蛋白质经过先浓缩再分离的过程，在分离胶内，较小的蛋白质移动更快，分离的蛋白先后进入到收集槽内，被分别收集起来，如下图所示：

上样

浓缩

分离

收集纯品

       Gelfree 8100蛋白制备电泳仪和质谱结合时，制备蛋白质样品的操作流程：

电泳槽套盒：

       含8个独立通道，可同时或分别使用1—8个通道，处理1—8个样品，四种电泳槽套盒供选择。